細(xì)胞培養(yǎng)(cell culture)是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境(無(wú)菌、適宜溫度、酸堿度和一定營(yíng)養(yǎng)條件等),使之生存、生長(zhǎng)、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆技術(shù),在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。不論對(duì)于整個(gè)生物工程技術(shù),還是其中的生物克隆技術(shù)來(lái)說(shuō),細(xì)胞培養(yǎng)都是一個(gè)必不可少的過(guò)程,細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的大規(guī)模克隆。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個(gè)細(xì)胞經(jīng)過(guò)大量培養(yǎng)成為簡(jiǎn)單的單細(xì)胞或少分化的多細(xì)胞,這是克隆技術(shù)必不可少的環(huán)節(jié),而且細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的克隆。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是細(xì)胞生物學(xué)研究方法中重要和常用技術(shù),通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)既可以獲得大量細(xì)胞,又可以借此研究細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞的合成代謝、細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖等。
想要培養(yǎng)細(xì)胞可不是一件容易的事,一個(gè)步驟做錯(cuò),就會(huì)功虧一簣,恒遠(yuǎn)生物技術(shù)人員就給大家著重講解一下,細(xì)胞培養(yǎng)如何預(yù)防污染。
1.細(xì)胞污染的預(yù)防
①實(shí)驗(yàn)用品防止污染。細(xì)胞培養(yǎng)所用試劑、耗材、器材的清洗、消毒,各種溶液滅菌要仔細(xì),并在無(wú)菌實(shí)驗(yàn)檢測(cè)陰性后才能使用。操作室及剩余的無(wú)菌器材要定期清潔、消毒、滅菌。
②操作過(guò)程防止污染。
③穿著容易起靜電或吸附灰塵的衣物必須更換為白大褂后才能進(jìn)入細(xì)胞間。
④實(shí)驗(yàn)開始需要確定戴的手套沒(méi)有問(wèn)題,只要接觸過(guò)生物安全柜之外的物品,必須及時(shí)對(duì)手套進(jìn)行消毒。
⑤進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)間后關(guān)好門,坐下來(lái)盡量少走動(dòng)以免影響生物安全柜的風(fēng)簾。工作開始要先用75%酒精棉球擦手和瓶蓋。事先要嚴(yán)格檢查所用的器材、溶液和細(xì)胞,不要把污染品或未經(jīng)消毒的物品帶入無(wú)菌室內(nèi),更不能隨便使用,以免造成大規(guī)模污染。
⑥細(xì)胞操作時(shí)動(dòng)作要輕,必須在火焰周圍無(wú)菌區(qū)內(nèi)打開瓶口,并將瓶口放在火焰周圍簡(jiǎn)單轉(zhuǎn)動(dòng)燒灼,注意不要讓火焰把塑料瓶口燒化。
⑦實(shí)驗(yàn)操作時(shí)生物安全柜的隔板要盡可能放低,盡量減少談話,打噴嚏或咳嗽時(shí)絕對(duì)不能對(duì)著工作區(qū),以免造成不必要的污染。
⑧瓶蓋應(yīng)當(dāng)?shù)狗旁谶h(yuǎn)離自己的地方,以避免瓶蓋被誤操作所污染。
⑨不要從敞開的容器口上方經(jīng)過(guò),以避免衣服上掉落不明物體對(duì)細(xì)胞的污染。
⑩實(shí)驗(yàn)操作時(shí)要注意及時(shí)更換巴斯德吸管、移液槍槍頭和移液管,切勿一根管子做到底。一旦發(fā)現(xiàn)接觸了非潔凈或者無(wú)法確定潔凈的物品必須直接丟棄。實(shí)驗(yàn)完畢應(yīng)及時(shí)收拾,保持實(shí)驗(yàn)室清潔整齊,用75%酒精清潔臺(tái)面。
2.防止細(xì)胞交叉污染
①在進(jìn)行多種細(xì)胞培養(yǎng)操作時(shí),所用器具要嚴(yán)格區(qū)分,作上標(biāo)記便于辨別。按順序進(jìn)行操作,一次只處理一種細(xì)胞,多種細(xì)胞多種操作一起進(jìn)行時(shí)易發(fā)生t昆亂。
②在進(jìn)行換液或傳代操作時(shí),粘有細(xì)胞的移液槍頭和移液管不要觸及試劑瓶瓶口,以免把細(xì)胞帶到培養(yǎng)基中污染其他細(xì)胞。
③所有細(xì)胞一旦購(gòu)置,或從別處引入,或自己建立,必須及時(shí)保種凍存,一旦發(fā)生污染可重新復(fù)蘇細(xì)胞,繼續(xù)培養(yǎng)。
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原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司