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山羊腫瘤壞死因子α試劑盒由上海恒遠生物科技有限公司現(xiàn)貨供應(yīng)，免費代測，產(chǎn)品上架一個星期內(nèi)，參與促銷活動�？梢詤f(xié)助實驗和委托實驗，技術(shù)人員全程指導(dǎo)。我們會在您交付標(biāo)本的一個星期內(nèi)出結(jié)果，將實驗過程和結(jié)果快遞到您手中！我公司試劑盒產(chǎn)品在保證質(zhì)量和價格方面都有絕對優(yōu)勢，產(chǎn)品售前、售中、售后都有專人服務(wù)，請您放心購買！特價促銷活動進行中··············大家快來搶購吧！電話：021-60517348。
| 異常 | 結(jié)果描述 | 原因分析 | 對策 |
| 白板 | 顯色步驟結(jié)束后，酶標(biāo)板所有孔均無顏色。陽性對照不顯色。 | 試劑已過效期，或不同試劑盒組分混用 | 檢查試劑的組分及批號，確認未過期以及所有組分均屬對應(yīng)的試劑盒。不同試劑盒或不同批號的試劑不能混用。 |
| 錯加、漏加試劑底物、顯色劑 A或B | 嚴格按說明書的步驟操作，加完試劑后可觀察一下液面高度是否一致，以減少漏加現(xiàn)象。 | ||
| 洗板及加樣過程中，酶標(biāo)受污染失活失去催化顯色劑顯色的能力 | 確認盛酶標(biāo)的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等，確認配制洗液的容器已洗干凈。 | ||
| 終止液誤作洗滌液稀釋或當(dāng)?shù)孜锞彌_液配制 | 每次配制時都應(yīng)看清標(biāo)簽標(biāo)明物質(zhì) | ||
| 蒸餾水有問題 | 確認配制洗液的純化水達到要求且未污染，與好蒸餾水比較。 | ||
| 顯色弱、靈敏度低 | 實驗結(jié)束后，包括陽性對照、質(zhì)控在內(nèi)的所有板孔顏色均較淡。 | 試劑盒超過期， 超過有效期的產(chǎn)品可能會產(chǎn)生很弱的信號； 試劑盒沒有按規(guī)定進行保存，受高溫影響； | 實驗前檢查試劑的組分及批號，確認試劑未過期。 不要將試劑盒長時間置于常溫下，按使用規(guī)定儲藏。 |
| 試劑、樣品用前未平衡至室溫 | 從低溫冰箱中取出的試劑及樣品應(yīng)置室溫平衡 20分鐘左右。 | ||
| 加入試劑的體積和時間有誤， 移液器計量不準(zhǔn)，吸嘴內(nèi)水分太多或不清潔； | 確定所使用的試劑體積正確，加入時間適當(dāng)。 校正移液器，移液器與吸嘴配合要緊密吻合。移液不宜太快，排放應(yīng)完全。 | ||
| 洗板及加樣過程中，酶標(biāo)受污染失活而失去催化顯色劑顯色的能力 | 確認盛酶標(biāo)的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等，確認配制洗液的容器已洗干凈，確認配制洗液的純化水達到要求且未受污染。 | ||
| 孵育時間及孵育溫度未達到要求 ，反應(yīng)板放入培養(yǎng)箱時注意溫度并及時調(diào)整。 | 孵育溫度應(yīng)控制在 37-38℃，孵育時間嚴格按照說明書操作。 保溫期內(nèi)不宜多開門，以免影響保溫。 | ||
| 洗板次數(shù)過多，或濃縮洗液稀釋倍數(shù)不符合要求；洗滌沖擊力太大。浸泡時間太長； | 嚴格按說明書要求稀釋濃縮洗液及洗板，減小洗滌沖擊力，按說明書要求置留洗滌液時間和洗滌次數(shù)。 | ||
| 顯色劑加量不足或順序顛倒，或混合后加入； | 顯色劑滴瓶垂直向下，持力均勻，滴速不宜過快，先加顯色劑 A，后加顯色劑B，不可將A、B液混合后加入 | ||
| 底物作用時間不夠； | 準(zhǔn)確定時。 | ||
| 蒸餾水水質(zhì)有問題； | 測定蒸餾水配制試劑對酶免疫法的影響。 | ||
| 實驗結(jié)束后，陰陽性對照正常，質(zhì)控正常，但臨床標(biāo)本感覺顯色較弱 | 待測標(biāo)本中可能不含強陽性標(biāo)本，故結(jié)果可能是正常的 | 如有懷疑，可復(fù)檢 | |
| 標(biāo)本加入疊氮鈉作為防腐劑 | 酶免實驗中的標(biāo)本禁用疊氮鈉作為防腐劑，可選用 proclin、硫柳汞等其他防腐劑 | ||
| 陰陽性對照正常，但質(zhì)控、參考品或個別弱陽性標(biāo)本未能檢出。 | 未達要求的孵育溫度及孵育時間可檢出強陽性標(biāo)本，但 質(zhì)控或弱陽性標(biāo)本受 溫度變化影響較大而被未檢出 | 質(zhì)控品或標(biāo)本避免反復(fù)凍融。標(biāo)本在一周內(nèi)使用的，可存于 2-8℃，如需長期保存，應(yīng)置于-20℃以下保存。質(zhì)控品應(yīng)小量分裝，并置于-20℃以下保存。 | |
| 質(zhì)控品或標(biāo)本高溫放置過久，或被反復(fù)凍融致待測物滴度下降，而未能檢出 | 重新設(shè)定酶標(biāo)儀的參數(shù)，特別是檢查濾光片是否匹配。 | ||
| 儀器設(shè)定不正確，濾光片不匹配 | 重新設(shè)定酶標(biāo)儀的參數(shù)，特別是檢查濾光片是否匹配 | ||
| 靈敏度過高、板底高、高背景 | 終止后，整板結(jié)果顯現(xiàn)均一的黃色或淡黃色；或陰陽性對照、質(zhì)控正常，標(biāo)本陰性標(biāo)本 OD值過高。 | 整板的黃板現(xiàn)象可能是由于錯加其他試劑造成，如同時操作兩對半試劑時，測 HbsAb板用于測HBsAg等； | 實驗前檢查試劑的組分及批號，確認所有組分均屬于對應(yīng)的試劑盒。不同試劑盒或不同批號的試劑不能混用 |
| 酶標(biāo)對吸頭的污染以及對盛放顯色劑容器的污染都易造成黃板現(xiàn)象； | 避免試劑組分間的交叉污染，確保吸頭、容器的干凈 | ||
| 顯色劑在光照條件下放置過久，實驗前已變藍 | 顯色劑 A、B未使用前避光保存 | ||
| 孵育溫度過高或孵育時間過長； | 孵育溫度應(yīng)控制在 37-38℃，孵育時間嚴格按照說明書操作。 | ||
| 未按要求洗板。特別是洗滌時每孔未注滿洗液，易造成花板黃板現(xiàn)象 | 嚴格按說明書要求洗板 | ||
| 花板，一般是由于臨床標(biāo)本的收集、處理和保存方法不當(dāng)造成 | 放置時間（自然放置 1~2h）及離心轉(zhuǎn)速（3000r/min）、離心時間（15min）應(yīng)引起注意。 | ||
| 出現(xiàn)隨機性的花板、跳孔現(xiàn)象 | 樣品離心不完全，反應(yīng)孔內(nèi)發(fā)生凝血或殘留細胞成分； | 充分離心， 3000rpm6分鐘以上。 | |
| 加樣時交叉污染； | 加標(biāo)本時盡量 避免交叉污染。如盛標(biāo)本的試管周圍常有血痂，易脫落，應(yīng)遠離酶標(biāo)板。 | ||
| 手工洗板造成的交叉污染 | 手工洗板時前 3次注洗液后應(yīng)立即棄去，后幾次再設(shè)定浸泡時間，可減少交叉污染 | ||
| 洗板機加液頭堵塞導(dǎo)致加液不滿或吸液殘留量較大，造成 花板、跳孔 | 疏通加液頭，使洗板時每孔均注滿洗液，吸液時殘留量要小。 | ||
| 拍板時交叉污染 | 洗板完畢拍板時用合適的吸水紙巾，不要把無關(guān)物質(zhì)拍進板孔，并盡量不要在同位置拍，以免交叉污染。 | ||
| 假陽性 | 假陽性現(xiàn)象是一個綜合現(xiàn)象，可參考上文 “靈敏度過高、板底高、高背景” 中的分析。這里只列舉常見的原因及對策。 | 計算 Cutoff值時使用的公式不正確，導(dǎo)致計算得出的CutOff值過低，從而導(dǎo)致出現(xiàn)假陽性 | CutOff值計算公式應(yīng)嚴格參照所屬產(chǎn)品的說明書，應(yīng)注意各個酶免產(chǎn)品的Cutoff值計算公式不盡相同 |
| 洗板時未能注滿洗液或洗板次數(shù)、浸泡時間不夠， 洗滌不充分，樣品中有其他成分殘留 導(dǎo)致花板、跳孔，假陽性增多 | 嚴格按說明書要求洗板。調(diào)整洗板機時，應(yīng)注意有時儀器標(biāo)示的液量與實際液量并不相符，應(yīng)根據(jù)實際情況調(diào)整至每孔注滿。 | ||
| 血清標(biāo)本處理不當(dāng)，如未除去細胞成分、纖維蛋白原及其它干擾物可出現(xiàn)孔底由變藍的跳孔現(xiàn)象，此標(biāo)本重復(fù)實驗結(jié)果往往是陰性； | 放置時間（自然放置 1~2h）及離心轉(zhuǎn)速（3000r/min）、離心時間（15min）應(yīng)引起注意 | ||
| 廠家試劑質(zhì)量的變化造成 | 國家標(biāo)準(zhǔn)要求提高靈敏度時，廠家試劑靈敏度也相應(yīng)提高，假陽率常常有所上升，但只要在合理范圍，是可以接受的 | ||
| 水質(zhì)問題 | 防止蒸餾水污染 | ||
| 加酶量過多（如 50uL誤認為100uL）或丙肝酶稀釋時加量過多 | 加酶前檢查移液器調(diào)節(jié)量是否準(zhǔn)確，稀釋酶時思想要集中 | ||
| 培養(yǎng)箱溫度超過 37℃或酶結(jié)合物反應(yīng)時間或底物顯色時間超過 | 放入板以前要檢查培養(yǎng)箱的溫度，準(zhǔn)確定時 | ||
| 底物配制時間過長、或底物污染 | 底物應(yīng)在酶反應(yīng)完畢即將洗滌前 5分鐘配制，注意避光 | ||
| 該批樣品放置時間過長，樣品污染 | 樣品應(yīng)保持新鮮，或低溫保存，防止污染 | ||
| 移液嘴重復(fù)使用，未洗凈或消毒不完全而用于加酶或底物 | 移液嘴盡可能一次性使用 | ||
| 重復(fù)性差 | 1、樣品數(shù)量不一，加樣時間長短不一 | 重復(fù)某一樣品時，加樣時間盡可能與次接近 | |
| 2、樣品加入后未混勻 | 加樣后在混勻器上充分混勻 | ||
| 3、酶標(biāo)儀濾光片不對或輸入波長不對 | TMB顯色用450/630波長 | ||
| 4、酶標(biāo)儀測定重復(fù)性差 | 校對酶標(biāo)儀 | ||
| 5、洗滌不正確 | 洗滌液注滿各孔但不要溢出。洗板時反應(yīng)板面向下，垂直用力甩凈內(nèi)容物（可多甩幾次），在干凈、無或少塵的吸水材料上拍干。洗板機洗板時不應(yīng)有堵孔，洗滌應(yīng)充分 | ||
| 6、溫育條件不一致（一次用水育，一次用恒溫箱） | 恒溫箱溫育較水浴顯色深， OD值高出0.1-0.15,均采用恒溫箱.如用水浴水溫應(yīng)控制在37℃ | ||
| 7、不慎多加或少加酶或顯色劑 | 多加時顯色深，少加則淺，用記號筆圈上，便于分析 | ||
| 8、閾值附近時陰時陽 | 同一樣品做三個復(fù)孔，以二個（含二個以上相同結(jié)果為準(zhǔn)） | ||
| 9、加樣量不足、保溫時間、洗滌條件一致 | 盡可能使用同一移液器和裝緊吸嘴重復(fù)測定標(biāo)本。條件、人員等應(yīng)盡量與上次保持一致 |
原創(chuàng)作者：上海恒遠生物科技有限公司
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