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點(diǎn)擊次數(shù):13213 發(fā)布時(shí)間:2013/7/18 9:37:16
熒光抗體染色方法及其分類
1.直接染色法
將標(biāo)記的特異熒光抗體直接加在抗原標(biāo)本上,經(jīng)一定溫度和時(shí)間的染色,洗去未參加反應(yīng)的多余熒光抗體,在熒光顯微鏡下便可見(jiàn)到被檢抗原與熒光抗體形成的特異性結(jié)合物而發(fā)出的熒光。直接染色法的優(yōu)點(diǎn)是:特異性高,操作簡(jiǎn)便,比較快速。缺點(diǎn)是:一種標(biāo)記抗體只能檢查一種抗原,敏感性較差。直接法應(yīng)設(shè)陰、陽(yáng)性標(biāo)本對(duì)照,抑制試驗(yàn)對(duì)照。
2.間接染色法
如果檢查未知抗原,先用已知未標(biāo)記的特異抗體(抗體)與抗原標(biāo)本進(jìn)行反應(yīng),作用一定時(shí)間后,洗去未反應(yīng)的抗體,再用標(biāo)記的抗抗體即抗球蛋白抗體(第二抗體)與抗原標(biāo)本反應(yīng),如果步中的抗原抗體互相發(fā)生了反應(yīng),則抗體被固定或與熒光素標(biāo)記的抗抗體結(jié)合,形成抗原-抗體-抗抗體復(fù)合物,再洗去未反應(yīng)的標(biāo)記抗抗體,在熒光顯微鏡下可見(jiàn)熒光。在間接染色法中,步使用的未用熒光素標(biāo)記的抗體起著雙重作用,對(duì)抗原來(lái)說(shuō)起抗體的作用,對(duì)第二步的抗抗體又起抗原作用。如果檢查未知抗體則抗原標(biāo)本為已知的待檢血清為抗體,基他步驟和檢查抗原相同。
由于免疫球蛋白有種屬特異性,因此標(biāo)記的抗球蛋白抗體必須用抗體同種的動(dòng)物血清球蛋白免疫其他動(dòng)物來(lái)制備。
間接染色法的優(yōu)點(diǎn)是既能檢查未知抗原,也能檢查求知抗體;用一種標(biāo)記的抗球蛋白抗體,能與在種屬上相同的所有動(dòng)物的抗體結(jié)合,檢查各種未知抗原或抗體,敏感性高。缺點(diǎn)是:由于參加反應(yīng)的因素較多,受干擾的可能性也較大,判定結(jié)果有時(shí)較難,操作繁瑣,對(duì)照較多,時(shí)間長(zhǎng)。間接法應(yīng)設(shè)陰、陽(yáng)性標(biāo)本對(duì)照,還應(yīng)設(shè)有中間層對(duì)照(即中間層加陰性血清代替陽(yáng)性血清)。
3.抗補(bǔ)體染色法
抗補(bǔ)體染色法簡(jiǎn)稱補(bǔ)體法,是間接染色法的一種改良法,首先由Goldwasser等建立。本法利用補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)的原理,用熒光素標(biāo)記抗補(bǔ)體抗體,鑒定未知抗原或未知抗體(待檢血清)。染色程序也分二步:先將未標(biāo)記的抗體和補(bǔ)體加在抗原標(biāo)本上,使其發(fā)生反應(yīng),水洗,然后再加標(biāo)記的抗補(bǔ)體抗體。如果步中抗原抗體發(fā)生反應(yīng),形成復(fù)合物,則補(bǔ)體便被抗原抗體復(fù)合物結(jié)合,第二步加入的熒光素標(biāo)記的抗補(bǔ)體抗體便與補(bǔ)體發(fā)生特異性反應(yīng),使之形成抗原-抗體-補(bǔ)體-抗補(bǔ)體抗體復(fù)合物,發(fā)出熒光。
抗補(bǔ)體染色法具有和間接法相同的優(yōu)點(diǎn),此外,還有其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn):即只需要一種標(biāo)記抗補(bǔ)體抗體,便能檢測(cè)各種抗原-抗體系統(tǒng)。因?yàn)檠a(bǔ)體的作用沒(méi)有特異性,它可以與任何哺乳動(dòng)物的抗原-抗體系統(tǒng)發(fā)生反應(yīng)。它的缺點(diǎn)是參與反應(yīng)的成分多,染色程序較復(fù)雜,比較麻煩。
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