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最新elisa實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)備工作發(fā)布

點(diǎn)擊次數(shù):13012   發(fā)布時(shí)間:2013/9/17 10:10:50

在常見的實(shí)驗(yàn)中,elisa試劑的測(cè)定過程為試劑準(zhǔn)備工作,加樣,洗滌,保溫等正常的實(shí)驗(yàn)流程,一次好的準(zhǔn)備工作可以使測(cè)定中試劑發(fā)揮的作用,也可以因?yàn)橐粋(gè)小步驟而發(fā)生多種測(cè)定結(jié)果。以下是小李為大家提供整理的elisa試劑*新實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備要點(diǎn),僅供大家參考,希望幫大家解決檢測(cè)上的疑問!

試劑的準(zhǔn)備
按試劑盒說明書的要求準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)中需用的試劑。ELISA中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液應(yīng)用pH計(jì)測(cè)量較正。從冰箱中取出的試驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存。
加樣
在ELISA中一般有3次加樣步聚,即加標(biāo)本,加酶結(jié)合物,加底物。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在LEISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。 加標(biāo)本一般用微量加樣器,按規(guī)定的量加入板孔中。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴,以免發(fā)生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測(cè)定(如間接法ELISA)需用稀釋的血清,可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液,再在其中加入血清標(biāo)本,然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物應(yīng)用液時(shí)可用定量多道加液器,使加液過程迅速完成。

保溫
在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng),即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后?乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間,這一保溫過程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在ELISA中似不恰當(dāng)。ELISA屬固相免疫測(cè)定,抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標(biāo)本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機(jī)會(huì),只有*貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個(gè)逐步平衡的過程,因此需經(jīng)擴(kuò)散才能達(dá)到反應(yīng)的終點(diǎn)。在其后加入的酶標(biāo)記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。

洗滌:
洗滌在ELISA過程中雖不是一個(gè)反應(yīng)步驟,但卻也決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。ELSIA就是靠洗滌來達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對(duì)蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,而在洗滌時(shí)又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來。可以說在ELISA操作中,洗滌是*主要的關(guān)鍵技術(shù),應(yīng)引起操作者的高度重視,操作者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌,不得馬虎。洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動(dòng)洗滌儀外,手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種


顯色和比色
(1) 顯色
顯色是ELISA中的*后一步溫育反應(yīng),此時(shí)酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物。

2) 比色
比色前應(yīng)先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體,然后將板正確放入酶標(biāo)比色儀的比色架中。


ELISA kit用途:科研實(shí)驗(yàn)等領(lǐng)域科學(xué)研究,不得用于臨床診斷
ELISA kit應(yīng)用:被測(cè)樣品的定性定量分析
elisa試劑盒庫(kù)存:現(xiàn)貨供應(yīng)、廠家低價(jià)直銷

原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司

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