Elisa實(shí)驗(yàn)的結(jié)果影響主要有兩個(gè)因素，一個(gè)是試劑盒的因素，另一個(gè)便是操作因素。實(shí)驗(yàn)操作需要大家按要求操作，并積累經(jīng)驗(yàn)。針對(duì)選擇elisa試劑盒先聽(tīng)上海恒遠(yuǎn)說(shuō)幾句，主要有以下兩點(diǎn)：一、根據(jù)實(shí)驗(yàn)室要求
一般Elisa檢測(cè)的是酶促反應(yīng)的可溶性產(chǎn)物，抗體上結(jié)合有相應(yīng)的酶，而反應(yīng)體系中添加有相應(yīng)的底物。這種酶促反應(yīng)生成具有特征性的顏色，可以通過(guò)分光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè)，堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。酶可以結(jié)合在一抗上，也可以結(jié)合在二抗上，還可以使用鏈霉親和素標(biāo)記的酶與親和素標(biāo)記的一抗結(jié)合。此外Elisa的結(jié)果檢測(cè)還包括放射性檢測(cè)、熒光檢測(cè)、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢測(cè)等。 單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于Elisa試劑盒，實(shí)際上有時(shí)候二者結(jié)合效果更好。
如果抗體間發(fā)生沖突或交叉反應(yīng)就會(huì)影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)的特異性。其中抗體來(lái)源所帶來(lái)的兼容性就是交叉反應(yīng)的一個(gè)因素。盡管現(xiàn)在購(gòu)買(mǎi)源自指定動(dòng)物的抗體越來(lái)越容易，我們?nèi)杂斜匾_認(rèn)一下是否會(huì)產(chǎn)生交叉反應(yīng)的問(wèn)題。在用雙抗夾心法進(jìn)行Elisa檢測(cè)時(shí)，檢測(cè)用的二抗必須特異性針對(duì)檢測(cè)一抗，而不能與捕獲抗體起反應(yīng)。如果檢測(cè)用二抗與捕獲抗體結(jié)合，實(shí)驗(yàn)特異性就會(huì)大打折扣。通常我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測(cè)一抗，來(lái)避免上述問(wèn)題。
二、根據(jù)Elisa類(lèi)型
雖然Elisa方法試劑盒有著多種類(lèi)型，不過(guò)它們都有一個(gè)共同特點(diǎn)，就是進(jìn)行抗原捕獲。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進(jìn)行捕獲。In-cell Elisa和酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISPOT是兩種特殊的類(lèi)型，In-cell Elisa需要將微孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行固定和通透化，然后再用抗體原位檢測(cè)。ELISPOT有點(diǎn)像蛋白印跡Western blot，先在帶膜的微孔板中培養(yǎng)細(xì)胞，然后在膜上檢測(cè)細(xì)胞分泌的抗原形成斑點(diǎn)。此外，我們還需要根據(jù)自身需要選擇96孔板或是384孔板進(jìn)行Elisa實(shí)驗(yàn)。
注意：在購(gòu)買(mǎi)Elisa試劑盒時(shí)，看其產(chǎn)品供應(yīng)商，比如索要三證、咨詢(xún)技術(shù)等方式，從而進(jìn)一步了解供應(yīng)商的可靠性。
原創(chuàng)作者：上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司
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