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四種DNA提取方法,拿走不謝

點擊次數(shù):13374   發(fā)布時間:2017/7/13 9:30:24


       為了研究DNA分子在生命代謝中的作用,常常需要從不同生物材料中提取DNA。由于DNA分子在生物體內的分布及含量不同,要選擇適當?shù)姆椒ㄌ崛NA。下面我們就總結了四種dna提取方法并做詳細說明和比較。

一.濃鹽法提取dna:
      A. 利用RNA和DNA在電解溶液中溶解度不同,將二者分離,常用的方法是用1M 氯 納提取化鈉抽提,得到的DNP粘液與含有少量辛醇的 CCL4一起搖蕩,使乳化,再離心除去蛋白質,此時蛋白質凝膠停留在水相及CCL4相中間,而DNA位于上層水相中,用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽沉淀出來.
      B. 也可用0.15 MNaCL液反復洗滌細胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白,再按CCL4---異醇法除去蛋白.
兩種方法比較,后種方法使核酸降解可能少一些.
      C.以稀鹽酸溶液提取DNA 時,加入適量去污劑,如SDS可有助于蛋白質與DNA 的分離。在提取過程中為抑制組織中的DNase對DNA 的降解作用,在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15MNaCL,0.015M檸檬鈉,并稱SSC溶液,提取DNA.

二.陰離子去污劑法提取dna: 用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質變性,可以直接從生物材料中提取DNA .由于細胞中DNA與蛋白質之間常借靜電引力或配位鍵結合,因為陰離子去污劑能夠破壞這種價鍵,所以常用陰離子去污劑提取DNA

三.苯酚抽提法提取dna:苯酚作為蛋白變性劑,同時抑制了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時,由于蛋白與DNA 聯(lián)結鍵已斷,蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。離心分層后取出水層,多次重復操作,再合并含DNA 的水相,利用核酸不溶于醇的性質,用乙醇沉淀DNA 。此時DNA是十分粘稠的物質,可用玻璃漫漫繞成一團,取出。此法的特點是使提取的DNA保持天然狀態(tài)

四.水抽提法提取dna:利用核酸溶解于水的性質,將組織細胞破碎后,用低鹽溶液除去RNA,然后將沉淀溶于水中,使DNA充分溶解于水中,離心后收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調節(jié)至2.6M.加入2倍體積95%乙醇,立即用攪拌法攪出.然后分別用66% ,80%和95%乙醇以及丙銅洗滌,*后在空氣中干燥,既得DNA樣品.此法提取的DNA中蛋白質含量較高,故一般不用.為除蛋白可將此法加以改良,在提取過程中加入SDS.

原創(chuàng)作者:上海恒遠生物科技有限公司

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