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如何完善ELISA試劑盒實驗中的過失

點擊次數(shù):12878   發(fā)布時間:2019/8/26 9:18:12

     ELISA操作步驟多,新手操作難免會有過失。而這些過失很多是由細節(jié)不夠好造成的,減少過失的方法有很多,比如做實驗時少說話,防止唾液掉進酶標條中。當然,大家還要學會自己發(fā)掘問題,找出原因。那么我們要如何完善elisa試劑盒實驗中的過失? 
 
    ①:評估試劑的實用性,試劑的穩(wěn)定與否,對準確率的高低到頭重要。在試劑啟用前,應(yīng)進行陰、陽對照及樣品反復(fù)比照試驗,判定試劑符合要求后方可使用。
 
    ②:操作前仔細閱讀說明書,嚴格按照說明書要求進行規(guī)范化操作。不同批號的試劑不可混用。值得改進的地方,反復(fù)試驗確定成立后才能改進,比如洗板次數(shù)的掌握等。
 
    ③:加樣要準確、快速。加樣不準確,酶生成物的量不能確定,直接影響顯色結(jié)果。另外,顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān),所以加樣應(yīng)慎重。要求在一定時間內(nèi)加樣完畢的實驗,如果加樣遲緩,便出現(xiàn)誤差,而且試劑長時間暴露在外,尤其室溫過高時,保存期會縮短甚至失效。
 
    ④:檢驗技師應(yīng)具備從事實驗室操作的基本素質(zhì)和實踐經(jīng)驗。能熟練操作實驗儀器、器械,具有一定總結(jié)和分析問題的能力,對實驗中出現(xiàn)的意外情況能及時妥善解決。
 
    ⑤:使用校對過的微量移液器,排除自然誤差。移液器準確與否對定量檢測尤為重要。
 
    ⑥:嚴格掌握顯色時間,顯色時間過短,加入終止液反應(yīng)終止后,底物結(jié)合物的量過少,易出現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時間后顯色,應(yīng)判為假陽性,這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑后立即顯色,不可報陽性,這可能是本底顯色的結(jié)果。
 
    ⑦:洗滌徹底,洗板不徹底,酶結(jié)合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性。另外,洗滌液要新鮮,現(xiàn)用現(xiàn)配,陳舊的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,也可能出現(xiàn)假陽性。
 
    ⑧:嚴控反應(yīng)時間,反應(yīng)時間過長,酶失活;反應(yīng)時間過短,酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合,生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假陰性。

原創(chuàng)作者:上海恒遠生物科技有限公司

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