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點(diǎn)擊次數(shù):13054 發(fā)布時間:2020/1/2 8:40:02
細(xì)菌與真核細(xì)胞存在著很大的區(qū)別,但也有相同之處。
細(xì)菌與真核細(xì)胞的轉(zhuǎn)染有何異同準(zhǔn)確來說,細(xì)菌叫“轉(zhuǎn)化”,真核細(xì)胞叫“轉(zhuǎn)染”。
轉(zhuǎn)染的定義是“將具生物功能的核酸轉(zhuǎn)移或運(yùn)送到細(xì)胞內(nèi)并使核酸在細(xì)胞內(nèi)維持其生物功能”。其中,核酸包括DNA(質(zhì)粒和線性雙鏈DNA),反義寡核苷酸及RNAi(RNAinterference);蜣D(zhuǎn)染技術(shù)已廣泛應(yīng)用于基因組功能研究(基因表達(dá)調(diào)控,基因功能,信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和藥物篩選研究)和基因治療研究。
由外來DNA引起生物體遺傳性狀改變的過程稱為轉(zhuǎn)化(transformation)。噬菌體常?筛腥炯(xì)菌并將其DNA注入細(xì)菌體內(nèi),也可引起細(xì)菌遺傳性狀的改變。通過感染方式將外來DNA引入宿主細(xì)胞,并導(dǎo)致宿主細(xì)胞遺傳性狀改變的過程稱為轉(zhuǎn)染(transfection)。轉(zhuǎn)染是轉(zhuǎn)化的一種特殊形式;蚬こ:有目的的通過分子克隆技術(shù),人為的操作改造基因,改變生物遺傳性狀的系列過程。載體:能在連接酶的作用下和外源DNA片段連接并運(yùn)送DNA分子進(jìn)入受體細(xì)胞的DNA分子。轉(zhuǎn)化:指質(zhì)粒DNA或以它為載體構(gòu)建的重組DNA導(dǎo)入細(xì)菌的過程。感染:以噬菌體、粘性質(zhì)粒和真核細(xì)胞病毒為載體的重組DNA分子,在體外經(jīng)過包裝成具有感染能力的病毒或噬菌體顆粒,才能感染適當(dāng)?shù)募?xì)胞,并在細(xì)胞內(nèi)擴(kuò)增。
基因轉(zhuǎn)染需要一定的轉(zhuǎn)染試劑將帶有目的基因的載體運(yùn)送到細(xì)胞內(nèi)。早期的磷酸鈣轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染效率很低,且對很多細(xì)胞株無效,因此不能滿足很多科研工作的需要。目前,常用的轉(zhuǎn)染試劑是陽離子脂質(zhì)體和陽離子聚合物,它們在克服細(xì)胞屏障方面跟病毒有很相象的特征,容易透過細(xì)胞膜。其中,陽離子脂質(zhì)體在體外基因轉(zhuǎn)染中有很高的效率,然而在體內(nèi),它迅速被血清清除,在肺組織內(nèi)累積,誘發(fā)強(qiáng)烈的抗炎反應(yīng),這將導(dǎo)致高水平的毒性,因此,在很大程度上限制了其應(yīng)用。由于陽離子脂質(zhì)體的局限性,陽離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑日益受到重視。轉(zhuǎn)化特指將質(zhì)粒DNA或以其為載體構(gòu)建的重組DNA導(dǎo)入細(xì)菌體內(nèi),使之獲得新的遺傳特性的一種方法。它是微生物遺傳、分子遺傳、基因工程等研究領(lǐng)域的基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)。受體細(xì)胞經(jīng)過一些特殊方法(如:電擊法,CaCl2等化學(xué)試劑法)處理后,使細(xì)胞膜的通透性發(fā)生變化,成為能容許外源DNA分子通過的感受態(tài)細(xì)胞。進(jìn)入細(xì)胞的DNA分子通過復(fù)制、表達(dá)實(shí)現(xiàn)遺傳信息的轉(zhuǎn)移,使受體細(xì)胞出現(xiàn)新的遺傳性狀。
原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司
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