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影響ELISA試驗效果常見問題原因分析及解決辦法

點擊次數(shù):13292   發(fā)布時間:2012/7/4 16:26:54

影響ELISA試驗效果常見問題原因分析及解決辦法

 

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       ELISA試劑盒試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給同行帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。

      操作步驟
      可能原因
      解決辦法
      選擇試劑
      選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
      加   樣
       
      1.血清或血漿標本分離不好即進行加樣;
      2.手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時);
      3.加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
       
      1.標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
      2.加樣后及時放入孵箱。
      3.加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
      4.如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
      5.標本較多時,請分批操作。
      孵   育
      1.孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗徹底;
      2.孵育時間人為延長,導致非特異性結(jié)合緊附于反應孔周圍,難以清洗徹底。
      1.貼封片或加蓋;
      2.按說明步驟嚴格控制操作時間。
      洗   板
      1.采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。
      2.采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不徹底;洗板針堵塞,抽吸不完全;洗板不暢,導致洗板效果差。
      3.反應板過多造成洗板等待時間長。
      1.保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
      2.合理安排,或多用幾臺洗板機。
      顯   色
      1. 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;
      2. 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。
      1. 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用;
      2. 加樣時保持顯色劑不外流;
      3.A、B液應避免接觸金屬器械。
       終   止
      加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導致假陽性增加。
      加終止液時應避免產(chǎn)生氣泡。
      讀   板
      讀板時板底不清潔。
      應保證酶標板清潔。
      全過程
      1.整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸;
      2.實現(xiàn)ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質(zhì)量。

          在實際操作中,除了選擇優(yōu)良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本,才能保證檢測質(zhì)量,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現(xiàn)ELISA檢測試劑盒標準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。

      聯(lián)系人:張經(jīng)理
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      原創(chuàng)作者:上海恒遠生物科技有限公司

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