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斑馬魚晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)ELISA實驗操作手冊

點擊次數(shù):12181   發(fā)布時間:2023/11/1 10:25:17

AGES就是糖基化終末產(chǎn)物的英文簡寫,它是非酶糖基化反應(yīng)(Maillard反應(yīng))的終末產(chǎn)物。是指蛋白質(zhì)、脂質(zhì)或核酸等大分子在沒有酶參與的條件下,自發(fā)的與葡萄糖或其他還原單糖反應(yīng)所生成的穩(wěn)定的共價加成物。本試劑盒用于測定斑馬魚血清,血漿及相關(guān)液體樣本中晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)含量。那么在ELISA實驗中有哪些注意事項呢,恒遠生物小編為大家總結(jié)ELISA實驗操作注意事項。

一、實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中斑馬魚晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)水平。用純化的斑馬魚晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs),再與HRP標記的晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中斑馬魚晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)濃度。 

二、標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

三、注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標準曲線,做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。

完整版說明書可咨詢業(yè)務(wù)員獲取哦,恒遠生物擁有一批技術(shù)精湛、經(jīng)驗豐富的技術(shù)工程師,經(jīng)過多年積累,試劑盒現(xiàn)已涵蓋種屬甚多,上千余種指標,有快速、簡單、準確的特點,迎合了廣大高校和科研人員的需求,提高了科研人員的工作效率,成熟穩(wěn)定的質(zhì)量,完善的庫存及供應(yīng)體系以及穩(wěn)定的技術(shù)指導,產(chǎn)品均能現(xiàn)貨供應(yīng)。期待您的咨詢。

原創(chuàng)作者:上海恒遠生物科技有限公司

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