洗滌這是實驗操作過程中看似很簡單但又至關(guān)重要的一個步驟,所以上海恒遠生物科技有限公司結(jié)合了技術(shù)人員的建議和指導(dǎo)來給你們普及一下這方面的知識。
洗滌方法:
1.自動洗板機:每孔加入洗滌液350ml,注入與吸出間隔60秒。洗板5次。
2.手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,在潔凈的吸水紙上拍干,每孔加洗滌液350ml,浸泡1-2分鐘,吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內(nèi)的液體,在厚的吸水紙上拍干。洗板5次。
生物試劑實驗開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫;試劑或樣品配制時,均需充分混勻,并盡量避免起泡。
3.加樣:分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔?瞻卓准訕悠废♂屢100ml,余孔分別加
標準品或待測樣品100ml,注意不要有氣泡,加樣時將樣品加于酶標板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。給酶標板覆膜,37℃孵育2小時。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
4.棄去液體,甩干,每個孔中加入Detection Ab工作液100ml(在使用前15分鐘內(nèi)配制),酶標板加上覆膜,37℃溫育1小時。
5.棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板 3次,每次浸泡1-2分鐘,大約350ml/每孔,甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。
6.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內(nèi)配制)100ml,加上覆膜,37℃溫育1小時。
7.棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,方法同步驟3。
8.每孔加底物溶液100ml,酶標板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據(jù)實際顯況酌情縮短或延長,但不可超過30分鐘。當標準孔出現(xiàn)明顯梯度時,即可終止)。
9.每孔加終止液50ml,終止反應(yīng),此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。
10.立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度(OD值)。應(yīng)提前打開酶標儀電源,預(yù)熱
儀器,設(shè)置好檢測程序。
11.實驗完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束。
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