將抗原或
抗體固定在進程稱為包被(coating)。換言之,包被便是抗原或抗體結(jié)合到固相載體外表的進程。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是經(jīng)過物理吸附結(jié)合的,靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團與固相載體外表的疏水基團間的效果于。
這種物理吸附對錯特異性的,受蛋白質(zhì)的分子量、等電點、濃度等的影響。載體對不同蛋白質(zhì)的吸附才能是不相同的,大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)一般含有更多的疏水基團,故更易吸附到固相載體外表。IgG對聚苯乙烯等固相具有較強的吸附力,其聯(lián)合多發(fā)生在Fc段上,抗體結(jié)合點露出于外,因而抗體的包被一般均選用直接吸附法。
蛋白質(zhì)抗原大多也可選用與抗體類似的辦法包被。當(dāng)抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區(qū)域時,抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充沛露出,在這種情況下,直接包被效果欠安,能夠選用直接的捕獲包被法,即先將針對該抗原的特異抗體作預(yù)包被,其后經(jīng)過抗原抗體反響使抗原固相化。此直接結(jié)合在固相上的抗原遠(yuǎn)離載體外表,其抗原決定簇也得以充沛露出。
直接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析效果,包被在固相上的抗原純度大大進步,因而含雜質(zhì)較多的抗原也可選用捕獲包被法,試驗的特異性、敏感性均由此得以改進,重復(fù)性亦佳。直接包被的另一優(yōu)點是抗原用量少,僅為直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質(zhì)抗原可選用特別的包被辦法。例如,在檢測抗DNA抗體時,需用DNA作為包被抗原,而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結(jié)合?蓪⒕郾揭蚁┌逑冉(jīng)紫外線照耀(例如30W紫外燈,75cm照耀12小時),以添加其吸附性能。
固相載體先用堿性蛋白質(zhì),如聚賴氨酸、魚精蛋白等作預(yù)包被,也可進步核酸的結(jié)合力。也可用親和素生物素體系作直接包被,即用親和素先包被載體,然后參加生物素化的DNA,這種包被辦法均勻、牢固,已擴展應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。
脂類物質(zhì)無法與固相載體結(jié)合,可將其在有機溶劑(例如乙醇)中溶解后參加ELISA板孔中,開蓋置冰箱過夜或涼風(fēng)吹干,待酒精蒸發(fā)后,讓脂質(zhì)自然干固在固相外表?剐牧字贵w的ELISA試劑一般選用這種包被辦法。
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