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蛋白質(zhì)多肽Iodogen碘化法

閱讀次數(shù):1443   發(fā)布時(shí)間:2012/9/20 8:49:06

 1.原理 用Iodogen為氧化劑,對(duì)蛋白質(zhì)和多肽抗原進(jìn)行碘化標(biāo)記,把125I直接引進(jìn)分子中的酪氨酸殘基上。標(biāo)記過(guò)程中被標(biāo)記樣品不與Iodogen混合,標(biāo)記后取出樣品即停止反應(yīng),不使用任何還原劑。
  2.方法
  (1)標(biāo)記之前,先把Iodogen溶于有機(jī)溶劑,涂于管底,并使之干燥。
 。2)標(biāo)記時(shí),將蛋白質(zhì)溶液10~20μg/10μl(0.5mol/L,pH7.5PB)置于反應(yīng)管中,反應(yīng)管置于冰浴中。碘化時(shí),125I與蛋白質(zhì)克分子之比例為1~1.2。反應(yīng)時(shí)間在溫和的連續(xù)的攪拌下可達(dá)10min,從反應(yīng)管中轉(zhuǎn)移出反應(yīng)混合液,使其反應(yīng)停止。反應(yīng)液轉(zhuǎn)移到含有200μl0.01mol/L、pH7.2PB和0.15mol/L NaCl溶液中,層析分離前再放置5min,使其未標(biāo)記的碘離子還原成分子碘,以避免在帶有緩沖液的柱中使白蛋白碘化。
  3.注意事項(xiàng)
 。1)涂有Iodogen的反應(yīng)管,有氮?dú)庵忻芊,并貯存在-20℃條件下,至少可用3個(gè)月。打開(kāi)管,使用時(shí)間很短。
  (2)碘化反應(yīng)時(shí)間,7min時(shí)標(biāo)記率達(dá),10min時(shí)略有減少。PH6.0~8.5時(shí),標(biāo)記率。
 。3)Iodogen與蛋白質(zhì)的比率是標(biāo)記率的函數(shù)。的標(biāo)記率是1克分子的Iodogen與8克分子或再多量之比。

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