大鼠巨噬細胞炎性蛋白3β試劑盒 大鼠MIP-3β  大鼠elisa試劑盒

產(chǎn)品名稱：大鼠巨噬細胞炎性蛋白3β試劑盒     

各種種屬：人、大小鼠、豚鼠、兔子、豬、犬、牛、羊…
標(biāo)本齊全：血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿、組織液、關(guān)節(jié)液、胸腔溢液等…
檢測方法：酶聯(lián)免疫法/酶免法（ELISA）
產(chǎn)品用途：For laboratory use only,Not for drug or other uses.本公司可提供免費代測服務(wù).

試劑：
（1）　包被緩沖液（PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液）:
NaHCO３ 1.59克
NaHCO３　2.93克
加蒸餾水至1000ml
（2）  洗滌緩沖液（PH7.4PBS）：0.15M 　　
KH2PO4 0.2克
Na2HPO４·12H2O　2.9克
NaCl　8.0克 　　KCl　0.2克
Tween-20　0.05％　0.5ml
加蒸餾水至1000ml
（3）　稀釋液：
牛血清白蛋白（BSA） 0.1克
加洗滌緩沖液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10％使用。
（4）　終止液（2M　H２SO４）： 　　
蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸（98％）21.7ml。 　　
（5）　底物緩沖液（PH5.0磷酸棗檸檬酸）:
0.2MNa２HPO４（28.4克／L）25.7ml
0.1M檸檬酸（19.2克／L）　24.3ml
加蒸餾水50ml。
（6）　TMB（四甲基聯(lián)苯胺）使用液:
TMB（10mg／5ml無水乙醇）0.5ml
底物緩沖液（PH5.5）　10ml
0.75％H２O２　32μl
（7）　ABTS使用液:
ABTS　0.5mg 　　
底物緩沖液（PH5.5）　1ml
3％H２O２　2μl
（8）　抗原、抗體和酶標(biāo)記抗體。
（9）　正常人血清和陽性對照血清。

注意事項：
1.　正式試驗時，應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以實驗結(jié)果的性。有時本底較高，說明有非特異性反應(yīng)，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。 　　
2.　在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:
（1）　固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
（2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時。蛋白質(zhì)包被的*適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值而蛋白量*少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg／ml。
（3）　酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標(biāo)記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統(tǒng)里地滴定其工作濃度。
（4）　酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入 。
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